Introducción: Las infecciones asociadas a la asistencia sanitaria son consideradas uno de los indicadores de calidad en la atención hospitalaria. Objetivo: Evaluar la efectividad del programa de superación en la prevención de infecciones asociadas a la asistencia sanitaria desde la teoría ambientalista de Florencia Nightingale. Método: Investigación preexperimental longitudinal en servicios de mayor incidencia en infecciones asociadas a la asistencia sanitaria del hospital universitario Mártires del 9 de abril, Villa Clara en el periodo 2019-2020. La población de 139 profesionales enfermería con una muestra de 125, se aplicó una encuesta y se realizó una observación participante. Se recogió además el criterio de especialistas de grupos nominales. Resultados: El 78,40% eran licenciados en enfermería, un 49,60% con menos de 5 años de desempeño laboral. Sobre definición, localizaciones y gérmenes más frecuentes antes de la capacitación el 84,00% tenían inadecuado conocimiento y después el 92,80%. En normas de prevención y control antes de aplicada la capacitación el lavado de mano solo alcanzó 24,80% y después de 96,00%. En la observación de procederes el 77,60% recibieron evaluación de inadecuado, perfeccionando estas técnicas en un 90,40% después de aplicada la misma con una efectividad de 95.20%. Conclusiones: El programa de superación en la prevención de infecciones asociadas a la asistencia sanitaria resultó efectivo, se actualizaron conocimientos, modificando prácticas y actitudes y fomentando un entorno agradable desde la teoría ambientalista de Florencia Nightingale